免疫印迹(Western Blotting)技术服务

来源：Seebio.cn作者：亚星官网yaxin111人气：-发表时间：2012-03-09 14:02:00【大中小】

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

我们为您提供全套免疫印迹(western blot)技术服务和相关的试剂耗材。主要实验步骤如下：

1. 蛋白质抽提

●实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
●实验对象为细胞样品（细胞培养），每份样品取1×10⁶～1×10⁷细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。

2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。

3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。

4. 蛋白质转移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。

5. western blot膜的封闭和抗体孵育

A.膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
B.封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
C.加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。

6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。

7. western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。

8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。

western blot费用：每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可做8个样品。每张膜的费用：1500.0元。一抗另计，其它试剂免费，一抗订购时间约为3周。

时间：约2－3周。

Western Blotting相关的试剂和耗材

产　品　名　称	包　装	单　价(RMB)
Trypsin-EDTA(胰酶EDTA)	0.25%,100ml	150.00
蛋白裂解液（蛋白提取液）	10ml	60.00
PMSF	100mM 10ml	86.00
40% Acr/Bis (37.5:1)	100ml	100.00
40% Acr/Bis (29:1)	100ml	100.00
40% Acr/Bis (19:1)	100ml	100.00
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液	2x,1ml	28.00
SDS-PAGE电泳缓冲液	10x,500ml	100.00
蛋白胶快速染色液	100ml	120.00
蛋白转移缓冲液	10x,500ml	100.00
可逆型转移膜染色液	100ml	120.00
Tris-HCl Buffer,PH6.8(配浓缩胶）	0.5M, 250ml	100.00
Tris-HCl Buffer,PH8.8(配分离胶）	1.5M, 250ml	100.00
PBS buffer	20x,500ml	100.00
PBST buffer	20x,500ml	100.00
TBST buffer	20x,500ml	100.00
TBS buffer	20x,500ml	100.00
SDS	10%,100ml	100.00
洗脱抗体缓冲液(膜再生液）	100ml	100.00
二抗-HRP	0.2mg	175.00
预染Marker（20~120kDa）	250ul	200.00
ECL化学发光试剂	25ml	200.00
显影液	250ml	45.00
定影液	250ml	45.00
硝酸纤维素膜NC膜	15cm*20cm	100.00
PVDF膜	13.5cm*15cm	100.00
3MM滤纸	27cm*1M	50.00
X线暗盒	5*7int.	600.00
柯达X光胶片	5*7int. 100/pk	200.00
乳胶手套	100/pk	65.00
PE薄膜手套	100/pk	5.00

原装进口标签蛋白单克隆抗体

标签蛋白（Tag protein）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。

标签蛋白抗体(Tag-antibody)可用于检测各种商品化表达载体上的标签序列（如：DYKDDDDK, 6xHis, GFP, Myc，GST、HA等），籍以分析鉴定目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白，从而达到对相应的标签融合表达对蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量的研究。

本产品特点；

● 高敏感度 ● 高亲和力 ● 低背景 ●高性价比

标签蛋白单克隆抗体 (DYKDDDDK=FLAG)

标签	描述(克隆号)	包装
标签	描述(克隆号)	包装
DYKDDDDK（FLAG）	Anti DYKDDDDK tag (1E6)	200ug;1mg;5mg
	Anti DYKDDDDK tag (1E6), HRP	100ul
	Anti DYKDDDDK tag (1E6), Antibody Beads	1ml; 5ml; 25ml
6xHis	Anti 6xHis (9F2) (C-terminal specific)	200ug
	Anti 6xHis (9F2), HRP (C-terminal specific)	100ul
	Anti 6xHis (9C11) (N?C-terminal)	200ug
	Anti 6xHis (9C11), HRP (N?C-terminal)	100ul
	Anti 6xHis (21-48) (N?C-terminal)	200ug
	Anti 6xHis (28-75) (N?C-terminal)	200ug
	Anti 6xHis (48-75), Antibody Beads	1ml; 5ml
GFP	Anti GFP (mFX73) (for IP and IHC)	100ul, 100ul*5
GFP	Anti GFP (mFX75) (for Western Blotting)	200ug
GST	Anti GST (5A7)	200ug
GST	Anti GST (5A7), HRP	100ul
c-Myc	Anti c-Myc (9E10)	200ug
	Anti c-Myc (9E10), HRP	100ul
	Anti c-Myc (9E10), Antibody Beads	1ml; 5ml
HA	Anti HA, mAb (4B2)	200ug
	Anti HA, mAb (4B2), HRP	100ug
	Anti HA (4B2) Antibody Beads	1ml; 5ml