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众所周知,唾液酸是糖链的重要组成成分,是维持EPO体内生物效应所必需的。唾液酸含量影响净负电荷从而改善了糖蛋白药物(如促红细胞生成素EPO)的代谢动力学,糖基化对稳定EPO的体内活性具有重要作用,若缺乏糖链,则EPO在体内迅速被水解而失活.
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NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神经氨酸)的定量分析是监管机构在生物制药表征的产品标准规格指南中提出的一个要求。特别是,人类和非人类的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分别)相对水平测定是非常重要的,因为有些病人有高水平的抗神经氨酸(anti-NeuGc)抗体,这可导致中和反应和快速清除含有神经氨酸(NeuGc)的生物药品 (Nguyen等,2005)。由于唾液酸(NeuAc)和神经氨酸(NeuGc)在分析糖蛋白中具有重要意义,它通常被认为是生物治疗药物的关键质量属性(CQA)。
较广泛的唾液酸(NeuAc)和神经氨酸(NeuGc)比例确定方法是如下:
•通过轻度酸水解放糖蛋白上的唾液酸残基。
•用1-1,2 -二氨基-4,5 -亚甲基苯酚(DMB)荧光标记释放的唾液酸。
•通过高效液相色谱法(HPLC)或超高效液相色谱法(UHPLC)对DMB标记的唾液酸进行相对定量分析。
Ludger的DMB标记试剂盒(货号:LT-KDMB-A1),提供从糖蛋白释放唾液酸并用DMB标记的所有功能。该试剂盒包含可以检测高达22个糖蛋白样品(每样品含50-100 μg糖蛋白)的试剂和材料。每个标记可标记每个样品中大约10 pmol到2.5 nmol的唾液酸。
试剂盒中包含一系列唾液酸的参考标准品(含Neu5Ac,Neu5Gc,Neu5,7Ac2,Neu5,Gc9Ac,Neu5,9Ac2,Neu 5,7,(8),9Ac3Gc),以及NeuAc和NeuGc的定量标准品。这三个标准品可以随着释放的唾液酸样品进行DMB标记。
系列稀释液制备后的NeuAc和NeuGc定量标准品可用于定量分析。LudgerTag™DMB试剂盒中有提供关于如何制备的说明。如有需要NeuAc和NeuGc定量标准品也可在另行购买,请跟我们联系。